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圆二色光谱:激子耦合圆二色测试应用
  • 发布时间 : 2022-03-24 16:28:03
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  一、激子耦合圆二色

  激子耦合圆二色发生于大分子两个手性生色团之间。当两个生色团位置合适(距离短、角度合适、环境合适等),它们互相电子转移产生两个不同的CD带,如图1所示。激子耦合圆二色灵敏度和识别度高,它与给定的空间结构相关,可以获得复杂结构的绝对构型信息。激子耦合圆二色经常用在高分子、手性有机凝胶和其他手性大分子的可见光区,也可用于蛋白的近紫外区,是传统远紫外圆二色谱的补充。



图1:激子耦合能级说明





  二、实验条件
  2-氨基嘌呤是经典的荧光标记物,它与胸腺嘧啶或胞嘧啶配对。当两个2-氨基嘌呤相距较近,它们手性中心相互作用,大分子会扭曲并改变构象,这会产生激子耦合圆二色。本应用说明了在DNA和蛋白相互作用中,由2-氨基嘌呤导致的激子耦合圆二色。测试仪器为MOS-500圆二色光谱仪,波长范围为300-360 nm,狭缝为2 nm,采样速度为每点0.5 s。样品浓度为10 uM,石英比色池光程为1 cm,室温,没有氮气吹扫。空白采用同条件测试并自动扣减。

图2:2-氨基嘌呤



  三、结果
  含有2-氨基嘌呤的DNA-蛋白复合物的圆二色谱如图3所示。由于DNA自身的圆二色吸收信号一直到310 nm,所以DNA-蛋白复合物的圆二色谱中只看得到正的克顿效应。最大信号在330 nm处为1.2 mdeg,可以看出MOS-500圆二色光谱仪灵敏度很高。通过对比可以看到,没有加入DNA的圆二色光谱中没有对应的与圆二色吸收,通过圆二色光谱可以很明显区分有无激子耦合发生,如图4所示。



图3:圆二色谱:DNA+蛋白

图4:有和没有DNA情况下的圆二色谱



 四、结论
  用标准配置的MOS-500圆二色光谱仪可以很容易的测到激子耦合圆二色谱。通常激子耦合圆二色测试波长大于195nm,而MOS-500圆二色光谱仪在185nm以上不需要氮气吹扫,可以节省您仪器的运行成本。


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